蛇毒對血小板聚集的抑制作用

與血小板聚集誘導因數相比,對血小板聚集抑制因數方面的研究較少。這裡對較典型的抑制因數作些介紹。腺苷還具有抑制血小板聚集的作用。鑒於以上證據,Huang等認為:①只有少數蛇毒酸性PLA2是血小板聚集的抑制劑,而且這些蛇毒PLA2對血小板聚集的抑制作用不能用它

與血小板聚集誘導因數相比,對血小板聚集抑制因數方面的研究較少。根據現有的資料來看,具有抑制功能的因數大部分具有PLA2活性;有些具有ADP酶活性,小部分具有蛋白酶活性質。這裡對較典型的抑制因數作些介紹。

棕點竹葉青蛇毒具有促進和抑制血小板聚集雙重功能,其作用的組分分別是PLA2和核苷酸酶,前者有誘導血小板聚集的功能,還具有纖維蛋白原溶解活性。V-核苷酸酶是一條單肽鏈,用SDS-PAGE法測定為純蛋白,分子量為74000,對熱穩定,含有589個胺基酸殘基。該蛋白能水解ADP和AMP,其活性分別為101±8/_igPi/mg.min和504±28fig/mg.min。該酶ADP保溫,ADP被分解為腺苷,酶活性可以被EDTA抑制,Zn2+和Ca2+能使EDTA的抑制作用解除。用家兔血小板豐富的血漿為資料,該酶可以抑制ADP(2.OXl0-5mg/ml)、花生四烯酸鈉(100umol/L)、膠原蛋白(20fxg/ml)和低濃度凝血酶以及IonophoreA-23187(5fmiol/L)對血小板聚集的誘導作用,其中對膠原蛋白和IonophoreA-23187誘導作用的抑制不太明顯。該酶的作用不引起乳酸脫氫酶釋放。這說明該酶不會引起血小板破裂。對血小板豐富的血漿,5'-核苷酸酶更能發揮其酶的活性。Packham等(1969)發現,在血漿中ADP被水解成AMP和腺苷,而在無血漿的血小板懸液中,ADP主要變成AMP。腺苷還具有抑制血小板聚集的作用。血小板懸液含有很少纖維蛋白原,後者是ADP誘導血小板聚集的輔助因數。纖維蛋白原結合到血小板膜上是ADP起作用所必需的。總之,5'-核苷酸酶對血小板聚集的抑制在於除去可以引起其聚集的ADP,使其腺苷積累,而腺苷又會抑制血小板的聚集。

在所分離的五步蛇蛇毒純組分中(ADP酶5'-核苷酸酶、PLA2和纖維蛋白原),只有ADP酶(5yg/ml〜lOO^g/ml)表現出對血小板聚集有强烈的抑制作用。它能抑制由ADP(l(Vm0l/L)膠原蛋白(lO^g/ml)和花生四烯酸鈉對兔血小板豐富血漿的誘導作用。5'-核苷酸酶對ADP誘導的血小板聚集有較弱的抑制作用.其抑制率為31±4%(n=4P<0.05)。纖維蛋白原酶(第I和K峰)在100pg/ml濃度下對上述3種物質誘導的血小板聚集沒有明顯的抑制作用。但如果先把纖維蛋白原酶與血小板豐富的血漿預先保溫30min,那麼它可以抑制由ADP(KVM)和膠原蛋白(lO^g/ml)引起的血小板聚集作用,其抑制率分別為35士6%(n=4P<0.05)和34±9%(n=4P<0.05)。PLA2(lOOng/ml)不影響血小板聚集。ADP酶是分子量為94000的單鏈蛋白,活性為4.3frniolPi/mg.min,它同時具有磷酸二酯酶和弱的5'-核苷酸酶活性。如上所述,從蛇毒中分離的5'-核苷酸酶只能對ADP誘導的血小板聚集產生輕微的抑制作用,它與從棕點竹葉青蛇毒中分離的5-核音酸酶不同,後者對由低濃度膠原蛋白(20/ug/ml)、花生四烯酸鈉(lOOfmiol/L)或凝血酶(0.05IU/ml)誘導的血小板聚集有很强的抑制作用。這可能因為從尖吻蝮蛇毒中分離的5'-核苷酸酶沒有多少水解ADP的活性,而從蛇毒中分離的5'-核音酸酶有這種活性。認清ADP酶與5'-核苷酸酶的區別與聯系對理解這部分內容十分重要,ADP酶一般是只能專一水解ADP,對其他核苷酸沒有或極少有水解作用;而5'-核苷酸酶的底物就很廣泛,ADP屬於5'-核苷酸類化合物,但不同來源的5'-核苷酸酶其水解底物的最適底物不同,例如從蛇毒和蛇毒中分離的5'-核昔酸酶對ADP的水解活性就相差很大。一般地說,ADP酶都是血小板聚集的抑制劑,因為它們都能水解產生可聚集作用的ADP;而5'-核苷酸酶只有在它能够較多水解ADP的情况下才表現出抗聚集作用。

從紅口蝮蛇毒和恪鐵頭蛇毒中分離的a-纖維蛋白原水解酶對家兔血小板懸液表現出抑制血小板聚集的作用。從尖吻蝮蛇毒中分離的a-纖維蛋白原水解酶能輕微抑制由膠原蛋白、ADP誘導的血小板聚集作用。其中第I峰的a-纖維蛋白原酶表現出直接的作用,不需預先與血小板保溫;但第XI峰的a-纖維蛋白原酶如預先與血小板保溫則抑制作用更强。從蛇毒中分離的a-纖維蛋白原酶和從蛇毒中分離的a-纖維蛋白原酶第K峰水解特异性相似。但前者的抑制作用比後者更强。已知纖維蛋白原在各種誘導物誘導的血小板聚集過程中起重要作用,誘導物包括ADP、凝血酶等。有人認為蛇毒中的a-纖維蛋白原酶水解了纖維蛋白原和血小板膜受體結合相關的肽鍵,干擾了纖維蛋白原與受體的作用。

許多血小板聚集抑制因數都具有PLA2活性。前面已經說過,導致血小板聚集的途徑主要有三條:ADP釋放、血栓素CTXA2形成和血小板活化因數(PAF)的作用。在血栓素形成的過程中,首先是血小板膜磷脂經PLA2A解釋放出花生四烯酸(AA),然後通過環氧酶和血栓素合成酶的作用生成血栓素,從而誘導血小板聚集。血小板活化因數並不是預先存在於組織或細胞內,而是在某些能够啟動細胞內PLA2物質的誘導下形成。由此可見細胞內PLA2在血小板聚集中占居很重要的地位。但是,有些蛇毒PLA2卻是血小板聚集的抑制劑。蛇毒PLA2抑制血小板聚集的作用機制正在逐步得到闡明,現舉例如下。

Ouyang等(1983)從蝮蛇蛇毒中分離出一種可以抑制血小板聚集的因數,該因數為一條單鏈肽,分子量為14000,具有PLA2活性,屬於酸性蛋白。它對血小板聚集的抑制活性在pH為5.5條件下9CTC處理30mm仍然存在,但PLA2活性是熱敏感的。它能抑制凝血酶、花生四烯酸鈉、膠原蛋白和ionophoreA-23187誘導的血小板聚集,抑制的强度與所用劑量相關。研究結果表明,該因數的抑制作用與自身PLA2活性無關,由於這種PLA2不具有ADP酶或5'-核苷酸酶的活性,囙此認為它的作用與破壞釋放的ADP無關。Huang等(1984)進一步對如蛇毒中PLA2的作用機制進行研究。他們發現這種PLA2其酶活性可以被p-巰基乙醇破壞,對-溴苯甲醯甲基溴能够使酶活喪失,但抑制劑對血小板聚集的抑制作用不受影響。EGTA不影響抑制作用。Ca2+內流可以啟動血小板PLA2,也可以引起5-羥色胺的釋放,Ca2+的這種啟動作用不被這種PLA2抑制。Huang等(1984)的試驗表明:從蛇毒中純化的血小板聚集抑制劑不影響血栓素的代謝產物——丙二醯二乙醛的形成。它們的作用也不是以增强前利環素來抑制血栓素的生成;血小板活化因數誘導血小板聚集需要細胞外Ca2+、絲氨酸酯酶的活化作用和細胞內Ca2+的動員,而蛇毒PLA2作為血小板聚集的抑制劑並不降低Ca2+流量和細胞內Ca2+的動員,並不影響血小板活化因數途徑的作用;蛇毒PLA2血小板聚集抑制劑並非與酶的底物(磷脂醯乙醇胺、磷脂醯膽鹼和磷脂醯肌醇等)產生拮抗作用,因而並不破壞血小板膜,從而表明它們與磷脂的結合對於拮抗血小板活性並不重要。鑒於以上證據,Huang等認為:①只有少數蛇毒酸性PLA2是血小板聚集的抑制劑,而且這些蛇毒PLA2對血小板聚集的抑制作用不能用它們的酶活性來解釋。因為用BPB修飾了PLA2活性中心的His48殘基後,酶活性完全喪失但不影響抑制血小板的聚集作用。②由ADP、凝血酶、花生四烯酸、膠原蛋白等誘導血小板聚集時,蛇毒PLA2是非競爭性抑制劑,與這幾種誘導物質無關。從蛇毒中分離的PLA2在抑制血小板聚集的同時還能抑制血小板凝塊的收縮,這種現象可能與它作用於血小板肌動球蛋白有關。人血小板中含有原絲蛋白(Profilin),它結合球狀肌動蛋白(G-actin)並且抑制聚合作用。當血小板受聚集誘導劑啟動後,血小板內pH可能改變以及發生形態的變化,生成纖維狀肌動蛋白聚合體(F-actinpolymer)。蛇毒PLA2血小板聚集抑制劑並不抑制纖維狀蛋白的形成,而是在形成纖維狀蛋白聚合體之後,干擾細胞內血小板膜之間的結合而達到抑制血小板的聚集作用,或是起到干擾a-輔肌動蛋白(a-actinin)與受體的結合。鑒於蛇毒PLA2血小板聚集抑制劑同時能抑制血凝塊的收縮,囙此,推測它們可能是抑制血小板肌動球蛋白系統。完整的作用模式仍有待進一步闡明。

Li等(1985)從圓斑蜂泰國亞種蛇毒中分離出一.種PLA2血小板功能抑制因數,該因數可以抑制由ADP、腎上腺素、膠原蛋白或凝血酶引起的人血小板聚集。對蛇毒進行加熱處理可以降低PLA2活性和抗血小板聚集活性,但兩種活性的降低是不平行的。這種PLA2對血小板凝塊的收縮有較强的抑制作用,抑制作用的强弱與劑量大小有關。PLA2作用後,由凝血酶刺激形成的丙二醯二乙醛水准沒有影響,說明它的作用機制與蛇毒中分離的PLA2相似,不是以增强前列環素來抑制血栓素的生成。這種PLA2能使血小板中cAMP的水准升高,而cGMP的水准卻有較小的下降,這種作用不依賴所用劑量的大小而改變。cAMP可以通過如下途徑抑制血小板的功能:①通過啟動高密度管狀系統內的Ca2+-ATP酶使細胞質內Ca2+濃度降低。②抑制花生四烯酸和血小板啟動因數從血小板膜磷脂中釋放。③抑制血栓素對血小板的啟動作用而不影響血栓素A2的合成。④與血小板內微管結合,從而抑制微管的聚集。用顯微鏡觀察發現,從蛇毒中分離的PLA2作用血小板後其“細胞”骨架發生變化,血小板失去原來的盤狀結構,正常由ADP誘導的血小板聚集所產生的變化也被封锁。

有關具有抑制血小板聚集功能的pla2還有很多,這裡不一一介紹。儘管它們的作用機制千差萬別,但有一點比較肯定,就是它們的抑制功能與自身酶的活性關係不大。不少人發現它們抑制血小板聚集和血小板凝塊收縮作用與它們抑制肌動球蛋白系統以及微絲-微管系統有關。

本文標題: 蛇毒對血小板聚集的抑制作用
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