三尖瓣狹窄患者易疲乏，且會出現下肢水腫、噁心、嘔吐或噯氣等症狀，根據三尖瓣區舒張期雜音，結合典型頸靜脈a波和右心房增大體征，可初步考慮三尖瓣狹窄的診斷。確診有賴於超聲心動圖及心導管檢查。
1、心電圖檢查
心電圖可示三尖瓣狹窄如下特點：Ⅱ、Ⅲ、aVF導聯P波高尖，常大於0.25mV，提示右心房肥大。如果出現右室肥厚和電軸右偏，表明合併二尖瓣狹窄。
2、X線檢查
通過胸部X線檢查如果右心房明顯擴大，伴上腔靜脈增寬，同時右心室無增大，肺動脈不擴張，肺血减少，可基本判斷為單純三尖瓣狹窄。
3、頸靜脈搏動圖檢查
頸靜脈搏動圖有巨大a波是三尖瓣狹窄的特异性特徵。
4、超聲心動圖
三尖瓣狹窄確診必做都卜勒超聲心動圖、M型超聲心動圖和二維超聲心動圖。三尖瓣狹窄有以下超聲心動圖特徵。
（1）都卜勒超聲心動圖：在三尖瓣口右心室流入道處取樣，可探測到舒張期高速射流頻譜，並可測出跨瓣壓差，這是確診三尖瓣狹窄的重要名額，房、室的壓力階差>0.67kPa（5mmHg），彩色多普勒可在二維平面上顯示多彩鑲嵌的射流束。
（2）M型和二維超聲心動圖：三尖瓣葉增厚、回聲增强、活動僵硬、開放受限，右心房擴大，上、下腔靜脈及肝靜脈增寬。M型運動曲線EF、斜率减慢，瓣葉呈同向運動。
5、心導管檢查
這是實行三尖瓣分離術前必做的檢查，也是全面反映三尖瓣病變的必做檢查之一。三尖瓣狹窄診斷標準之一是平均舒張期壓力階差≥0.27kPa（2mmHg），心導管檢查可同步記錄右心房和右心室的壓力，在量測跨瓣壓力階差時，應考慮到患者生理情况下呼吸變化，是否存在心房顫動或低心排血量，這些因素都會影響量測結果。
6、心臟造影
右心房造影可見右心室充盈延緩，並可見三尖瓣增厚和活動受限，以及右心房壁增厚和右心房內徑擴大。